Vsebina
- Boljša vizualizacija
- Identifikacija in razvrstitev
- Zaznavanje sposobnosti preživetja
- Identifikacija celičnih struktur
Mikrobiologi s pomočjo mikroskopa preučujejo značilnosti mikroorganizmov, kot so alge, protozoje, bakterije, glive in virusi. Medtem ko je nekatere organizme, kot so celice protozojev in kvasovk, enostavno opaziti z mokrim nastavkom, bakterijske celice zahtevajo obarvanje. Znanstveniki so razvili več metod, kot so barvanje po Gramu, hitro kislinsko obarvanje in fluorescentno obarvanje za boljšo vizualizacijo bakterijskih celic in celičnih struktur. S takšnimi metodami obarvanja je mogoče določiti strukturne značilnosti, ki pomagajo pri razvrščanju bakterij.
Boljša vizualizacija
Bakterijski organizmi so tako majhni, da jih je večina vidna le pod mikroskopom z močjo povečave 1000X. Vendar pa samo povečevanje velikosti ne zagotavlja zadostne stopnje jasnosti, zato je treba bakterije pred opazovanjem obarvati, da se zagotovi jasnost, potrebna za vizualizacijo.
Identifikacija in razvrstitev
Barvanje bakterij za razlikovanje med bakterijskimi vrstami je znano kot diferencialno obarvanje. Madež po Gramu je en tak diferencialni madež, ki med bakterijami razlikuje glede na vsebnost njihove celične stene. Pri tej metodi bakterijske celice reagirajo s kristalno vijoličnim madežem in prevzamejo vijolično barvo. Ko dodate sredstvo za odstranjevanje barve, nekatere bakterijske celice izgubijo barvo, druge pa ne. Ko dodate safraninski madež, razbarvane celice obarvajo madež in postanejo rdeči, medtem ko bakterijske celice, ki niso izgubile barve, ostanejo vijolične. Bakterijske celice, ki prevzamejo rdečo barvo, se imenujejo gram-negativni organizmi, tiste, ki ne prevzamejo barve, pa so razvrščene kot gram-pozitivni organizmi. Obarvanje z gramom omogoča hitro metodo za prvotno identifikacijo bakterij, ki sodelujejo v okužbah. Prav tako postopek kislinsko hitrega obarvanja pomaga natančno določiti organizme iz razreda bakterij, imenovanih mikobakterije, kot je Mycobacterium tuberculosis.
Zaznavanje sposobnosti preživetja
V vzorcih bakterijske kulture je pogosto pomembno zaznati prisotnost živih bakterijskih celic. Metode obarvanja, kot je fluorescentno obarvanje, pomagajo ugotoviti, ali so kulturne celice sposobne preživeti ali ne. Žive bakterije lahko pretvorijo madež 5-ciano-2,3-ditolil tetrazolijevega klorida (CTC) v barvilo, ki kaže rdečo fluorescenco. Kadar kulture, obarvane s CTC, oddajajo takšno fluorescenco, to kaže na prisotnost sposobnih bakterij. Propidij jodid je madež, ki deluje samo na nežive celice, ki imajo poškodovane membrane, zato je koristen pri prepoznavanju odmrlih bakterijskih celic.
Identifikacija celičnih struktur
Obarvanje zagotavlja metodo jasne vizualizacije več celičnih struktur. Na primer, metoda obarvanja z gorivom omogoča identifikacijo jedra znotraj bakterijskih celic, medtem ko je Albertov madež uporaben pri vizualizaciji metahromatskih granul. Prav tako tehnika impregnacije iz srebra omogoča identifikacijo spirohetov. Flagele je enostavno opaziti, če jih obarvate z Ryu-jevim madežem. Malahitno zeleno obarvanje pomaga identificirati bakterijske spore.