Vsebina
- Lahka mikroskopija in celična biologija
- Razvilo je na desetine eksperimentalnih postopkov
- Kemični madeži in svetlobna mikroskopija
- Enostavnost povečave
- Prednosti fluorescentne mikroskopije
- Pomanjkljivost svetlobnih mikroskopov
Luč ali sestavljen mikroskop je orodje, s katerim se verjetno srečuje vsak študent biologije. Razumevanje prednosti svetlobnega mikroskopa bo omogočilo vpogled v obvladovanje njegove uporabnosti za učilnico ali kliniko. Številne eksperimentalne tehnike, ki so bile izpopolnjene za uporabo s svetlobnim mikroskopom, njegova enostavna uporaba in njegova sorazmerna cenovna dostopnost v primerjavi z drugimi vrstami mikroskopov, so prednostna izbira za številne aplikacije na področju življenjskih ved.
Lahka mikroskopija in celična biologija
Ker celic ni mogoče gledati s prostim očesom, je mikroskopija ključni sestavni del preučevanja celične strukture in funkcije. Svetlobni mikroskop uporablja svetlobni vir za osvetlitev vzorca na svetlem polju. Vzorec je obarvan, tako da so strukture, ki so običajno prosojne ali skoraj brezbarvne, temnejše od ozadja in lažje vidne. Druga tehnika mikroskopije je fluorescentna mikroskopija. Namesto da uporabite temen madež na svetlem ozadju, celice obarvamo s fluorescentnimi barvili in jih gledamo na temnem ozadju.
Razvilo je na desetine eksperimentalnih postopkov
Preučevanje tkiva s svetlobno mikroskopijo se izvaja že več kot 50 let. Svetlobna mikroskopija je najbolj dostopna oblika mikroskopije po vsem svetu in je še vedno eno glavnih orodij za usposabljanje patologov oziroma zdravnikov, ki diagnosticirajo bolezni s pregledom mikroskopske strukture tkiva. Na tisoče laboratorijev po vsem svetu je izpopolnilo več deset eksperimentalnih postopkov in mnogi od njih so prosto dostopni. Kombinacija nizkih stroškov in velike količine bioloških informacij, ki jih daje svetlobni mikroskop, je neprecenljivo orodje za raziskave in medicino.
Kemični madeži in svetlobna mikroskopija
Za opazovanje vzorca pod svetlobno mikroskopijo je potrebna pomoč barvnih kemičnih madežev. Ti modri, rdeči, zeleni in rjavi madeži se pritrdijo na tkivo s prozorno kemikalijo, imenovano permount, ki se ob izpostavitvi zraku strdi. Tako združeni ti kemični madeži in tkiva trajajo več let, ne da bi zbledeli, kar omogoča znanstvenikom, da pregledajo isti vzorec dlje časa brez izgube barve. Izguba vidnosti je omejitev fluorescentne mikroskopije, ker fluorescenčna barvila sčasoma bledijo.
Enostavnost povečave
Zmogljivost sestavljenega mikroskopa lahko zlahka poveča med opazovanjem repa majhne ribe, ki je 50-kratnik njegove dejanske velikosti, do opazovanja arterij v repu 400-krat večje od dejanske velikosti, ki jo druge vrste mikroskopov ne morejo primerjati. Patologi pregledajo biopsijo ali majhne koščke tkiva, odstranjene z iglo, pod sestavljenim mikroskopom in pogosto povečajo in pomanjšajo, da bi lahko najbolje ocenili. Sestavljen svetlobni mikroskop ostaja najboljša možnost za tovrstne raziskave.
Prednosti fluorescentne mikroskopije
Fluorescentna mikroskopija zagotavlja večje vizualne podrobnosti za gledalca, saj lahko fluorescentna barvila ciljajo na specifične strukture znotraj celice. Fluorescentne molekule v celičnem vzorcu, imenovane fluoroforji, absorbirajo svetlobo na eni valovni dolžini in oddajajo svetlobo različno valovno dolžino. Fluorescentna barvila lahko uporabimo s specifičnimi proteini in protitelesi, da poudarimo strukture in celo posamezne molekule znotraj celice. Tehnike fluorescentne mikroskopije omogočajo uporabo več barvil v vzorcu.
Pomanjkljivost svetlobnih mikroskopov
Tehnologija mikroskopije v zadnjih desetletjih eksplodira, nekateri naprednejši mikroskopi pa nudijo podrobnejše informacije kot klasični sestavljeni (lahki) mikroskop. Fluorescentni mikroskopi omogočajo znanstvenikom, da na celici v celici vidijo dva različna proteina z uporabo rdečih in zelenih markerjev, ki se prekrivajo in tvorijo rumeno barvo. Elektronski mikroskopi prikazujejo tridimenzionalne značilnosti površine celic. Če naštejemo eno pomanjkljivost svetlobnega mikroskopa, nima nekaterih naprednih zmogljivosti fluorescentne ali elektronske mikroskopije, ker uporablja le belo svetlobo. Vendar se elektronski mikroskopi in fluorescenčni mikroskopi gibljejo od deset do tisoč do sto tisoč dolarjev, medtem ko je sestavljeni mikroskop trenutno mogoče kupiti za slabih 100 dolarjev.