Vsebina
Izoliranje bakterij iz tal je pomemben prvi korak v mnogih mikrobioloških poskusih. Ko so izolirane, lahko bakterije dodatno analiziramo, da ugotovimo stvari, kot so njihove vrste in njihova funkcija v tleh. Tudi majhna količina zemlje lahko vsebuje milijone bakterij, zaradi česar je potrebno razredčiti vzorec zemlje, preden bakterije izoliramo iz vzorca.
Izmerite 100 ml. destilirano vodo v graduiranem valju in jo dodajte v sterilno steklenico.
Odtehtamo 1 g vzorca zemlje in ga dodamo v steklenico destilirane vode.Steklenico tesno zapremo in stresemo, da raztopino temeljito premešamo.
Sterilne epruvete označite z "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" in "10 ^ -6." V vsako epruveto dodajte 9 ml destilirane vode z eno od pipetov.
Prenesite 1 ml raztopine v steklenici v epruveto z oznako "10 ^ -3" z novo pipeto. Zaprite epruveto in jo nežno vrtite, dokler se raztopina dobro ne zmeša.
Z novo pipeto prenesemo 1 ml raztopine v epruveto "10 ^ -3" v epruveto "10 ^ -4". Zaprite epruveto "10 ^ -4" in vrtite, da se meša. Ponovite to metodo za prenos raztopine iz epruvete "10 ^ -4" v cev "10 ^ -5" in nato iz epruvete "10 ^ -5" v epruveto "10 ^ -6".
Nalepimo tri vzorce iz epruvete "10 ^ -4", "10 ^ -5" in "10 ^ -6". Z novo pipeto prenesite 1 ml raztopine iz epruvete v Petrijevo ploščo. Na ploščo dodajte približno 15 ml hranilnega agarja; nato postavite pokrov na krožnik in nežno vrtite, tako da agar pokriva dno plošče.
Naredite kontrolno ploščo tako, da v Petrijevo ploščo dodate 1 ml destilirane vode z novo pipeto. Dodajte agar; postavite pokrov in zasukajte krožnik.
Petrijeve plošče pustite pokonci, dokler se agar ne nastavi. Nato obrnite plošče in jih inkubirajte - v inkubatorju ali pri sobni temperaturi - za najmanj 24 ur in do pet dni.
Plošče odstranite iz inkubatorja po želenem času inkubacije. Številčne bakterijske kolonije preštejte na ploščah, ki vsebujejo približno 30 do 300 kolonij. S trajnim označevalcem označite kolonije, ki ste jih že šteli, da ne bi šteli istih kolonij dvakrat.
Razdelite število kolonij, preštetih z redčenjem, "10 ^ -4", "10 ^ -5" ali "10 ^ -6" - raztopine tal za vsako ploščo. Poiščite število obdelovalnih bakterij v prvotnem gramu zemlje s povprečjem rezultatov na vsaki števni plošči.