Vsebina
Znanstveniki uporabljajo serijska redčenja (serija 1:10 razredčenj) za izračun gostote populacije bakterijskih kultur. Ko posadimo in inkubiramo kapljico kulture, ki vsebuje majhno število bakterij, bo vsaka celica teoretično dovolj oddaljena od drugih celic, da bo oblikovala svojo kolonijo. (V resnici so nekatere kolonije potomci dveh bližnjih celic, vendar je to v redčenih kulturah redko, zato je število kolonij zelo dobra ocena števila celic, ki so bile prvotno prenesene na ploščo.) Ker je gostota populacije neznano, za uporabo na eni plošči z ustreznim številom kolonij je treba uporabiti različna redčenja.
Serijska redčenja
Šest epruvet (epruvete, ki vsebujejo 9 ml rastnega medija) označite kot 1 do 6. Šest plošč agarjev označite kot 1 do 6. S pipeto in sterilnimi 1 mililitrskimi (ml) nasveti pipete prenesite 1 ml bakterijske kulture v epruveto 1.
Dobro premešamo in s pipeto in sterilnimi 1 ml konice prestavimo 1 ml iz epruvete 1 v epruveto 2.
Ponovite korak 2 za preostale epruvete, pri čemer vsakič 1 ml prenesite iz zadnje uporabljene epruvete v naslednjo epruveto.
Za prenos 0,1 ml iz epruvete 1 na ploščo z agarjem uporabite pipeto in sterilne 0,1 ml konice. Vžgite stekleno palico v obliki črke L in jo uporabite za enakomerno razporeditev kapljice po plošči. 48 ur inkubirajte ploščo pri ustrezni temperaturi za bakterije, ki jih uporabljate. Različne vrste bakterij imajo različne optimalne temperature rasti. Če z referenčnim materialom ne najdete optimalne temperature rasti, plošče poskusite inkubirati pri 25 in 37 stopinjah.
Ponovite korak 4, pri čemer vsakič prenesite tekočino iz druge epruvete na njeno ustrezno ploščo.
Izračuni prebivalstva
Opazujte šest plošč in izberite tistega s 30 do 200 izoliranih kolonij.
Pomnožite število kolonij na plošči z 10, da izračunate število celic na ml kulture iz uporabljene epruvete za redčenje.
Število iz koraka 2 pomnožite z 10 ^ (število plošč), da izračunate število celic na ml prvotne kulture. Vrednost 10 ^ (številka plošče) je faktor redčenja kulture, ki se uporablja za cepljenje plošče.