Vsebina
Escherichia coli, E. coli, je bakterija, ki raste v spodnjem črevesju sesalcev. To bakterijo so prvič odkrili v poznih 1800-ih. Od takrat ima dolgo zgodovino uporabe pri znanstvenih raziskavah. Je najpogosteje uporabljen organizem v molekularni genetiki. Del razloga, zaradi katerega se E. coli pogosto uporablja v znanstvenih raziskavah, je ta, da ga je v laboratoriju enostavno gojiti. Dejavniki, zaradi katerih je E. coli enostavna za gojenje, so preproste prehranske potrebe, hitra rast in zmerne potrebe po vzdrževanju.
Sterilizirajte zanko za inokuliranje tako, da jo vstavite v plamen gorilnika Bunsen. Spodnjo polovico zanke prepustite skozi plamen, dokler ne porumeni.
Pustite, da se zanka ohladi. Dotaknete se ga lahko sterilnega agarja na plošči, da se prepričate, da se je ohladil. Zanke ne postavljajte na mizo in ne puščajte stika z drugim kot sterilnim agarjem ali z želeno kulturo zdaj, ko je bila sterilizirana.
Potopite zanko v kulturo E. coli in jo nato odstranite.
Odprite ploščico agarja in nežno drsite zanko naprej in nazaj po površini enega odseka agarja. Pazite, da ne boste praskali po agarju z zanko. Agar zagotavlja hranila, ki jih E. coli potrebujejo za rast.
Ponovno namestite zanko v plamen Bunsen gorilnika, da jo sterilizirate. Ko se palica zanke ohladi, jo dotaknite sterilnega dela plošče, da se prepričate, da je hladno, nato pa zanko drsite skozi prvo vrvico, da naredite drugi trak. Ta druga črta je razredčena različica prve črte. Ponovite ta postopek sterilizacije in drsenja, dokler več delov od agar plošče ne drsi. Razlog za to je, da lahko kasneje izbirate iz posameznih, klonskih kolonij. Tako boste imeli vsaj en odsek s posameznimi kolonijami - ne preveč koncentriran (kar bo imel preveč rasti in vam ne bo omogočil izbiranja iz ene kolonije) in ne preveč razredčen (kar ne bi dalo kolonij) .
Še zadnjič sterilizirajte zanko v plamenu, preden jo odložite na delovnem območju.
Vrh postavite nazaj na ploščo z agarjem. Ploščo obrnite na glavo in jo postavite v inkubator, ki je nastavljen na 37 stopinj Celzija (98,6 stopinj Fahrenheita). Ta idealna inkubacijska temperatura simulira temperaturo človeškega telesa, kjer prebiva E. coli. V 24 do 48 urah se bodo na ploščici agarja pojavile vidne kolonije bakterij E. coli.