Vsebina
Tekočinska kromatografija visoke ločljivosti je tehnika za laboratorijsko analizo zmesi. To je učinkovita vrsta kromatografije, ki za poganjanje vzorca mešanice skozi kolono uporablja visok tlak, ne pa samo gravitacije. Vbrizga se vzorec, nato pa črpalka, ki vsebuje visoke količine tlaka, pomaga, da se vzorec premakne vzdolž napolnjenega stolpca, kjer ga ločimo na posamezne komponente. To ločitev nato analizira detektor, da dobimo rezultate.
Mesto injiciranja
Da bi ga injicirali v HPLC, je treba vzorec najprej raztopiti v polarnem tekočem topilu, po možnosti takšnem z znanimi spektri HPLC, da se njegovi podatki razlikujejo od vzorcev. Tekoča raztopina, ki vsebuje vzorec, se postavi v instrument in pošlje v kolono. Dejanska lokacija mesta injiciranja je odvisna od znamke instrumentov. V večini primerov je postopek injiciranja avtomatiziran, v nekaterih primerih pa mora laboratorijski vzorec vbrizgati z majhno iglo iz brizge.
Sestavni del črpalke
Črpalna komponenta HPLC enote je potrebna, ker zagotavlja tlak, ki poganja vzorec skozi steber. Moč črpalke je različna, vendar močan lahko ustvari tlak do 6000 psi ali funtov na kvadratni palec, ki se uporabi po vbrizganju vzorca. To omogoča, da vzorec hitreje in učinkoviteje prehaja skozi stolpec, kot če bi kapljal skozi samo silo gravitacije.
Opis stolpca
Povečana hitrost vzorca, ki ga črpalka prenaša skozi kolono, omogoča uporabo druge vrste kolone kot tiste, ki se uporabljajo pri preprosti tekoči kromatografiji. Embalažni material v koloni ima lahko veliko manjšo velikost delcev, kar poveča površino in zato pomaga pri interakciji vzorca s kolono. Večina stolpcev HPLC deluje prek polarnosti. Vzorec se raztopi v polarnem topilu in kolono sestavljajo večinoma nepolarni ogljikovodiki. Polarni deli molekule vzorca zelo hitro preidejo skozi kolono, ker v glavnem komunicirajo s topilom, medtem ko vzorci nepolarnih komponent ostanejo v koloni in tvorijo šibke interakcije s komponentami kolone. Zato sestavni deli vzorcev izstopajo iz stolpca v vrstnem redu od večine polarnih do najbolj nepolarnih.
Funkcija detektorja
Detektorji se razlikujejo tudi glede na vrsto instrumenta HPLC, ki se uporablja. Vendar večina deluje na enak osnovni način. Vir ultravijolične svetlobe sije na ločenih sestavnih delih vzorca, ko se spuščajo s stolpca. Večina organskih spojin absorbira določeno količino svetlobe, tako da lahko detektor pobere koliko svetlobe absorbira. Detektor zabeleži tudi čas zadrževanja komponent glede na vrstni red, v katerem se spustijo iz stolpca. Ta rezultat lahko nato analiziramo na podlagi območja vrhov, da določimo natančno naravo sestavnih delov vzorcev.