Davno je bilo to, da je gensko inženirstvo znanstvena fantastika - da en organizem raste z lastnostmi drugega. Od sedemdesetih let prejšnjega stoletja so tehnike genske manipulacije napredovale do točke, ko je spajanje tuje DNK v organizem skoraj rutina. Na primer, geni za odpornost na škodljivce se lahko zapletejo v koruzo, geni za ustvarjanje humanega insulina se lahko dajo v bakterije, geni za posnemanje človeških rakov pa se lahko dajo v laboratorijske miši. Podrobnosti postopka so preveč zapletene, da bi jih lahko opisali v kratkem članku z veliko možnostmi na vsakem koraku, vendar je konceptualni oris logičnega zaporedja korakov dokaj preprost.
Inkubirajte plazmidno in zanimivo DNK z restrikcijskim encimom. Omejitveni encim bo zaznal določeno zaporedje baz DNK in na tej točki razrezal DNK. Restriktivni encimi izvirajo iz nekaterih obrambnih mehanizmov proti virusom bakterij. So molekule, ki bodo odrezale DNK, kjer bodo zaznale določen vzorec baz.
Inkubirajte razrezani plazmid in fragmente genomske DNK z ligazo DNA. Z večino restriktivnih encimov bodo imeli krožni plazmid in fragmenti genomske DNK komplementarne "lepljive konce", ki se bodo oprijeli drug drugega. DNA ligaza bo nato zaključila lepljenje kosov. Rezultat je kup krožnih plazmidov, ki vključujejo dele genomske DNK.
Vstavite plazmide v bakterije in gojite bakterije, da rastejo kolonije organizmov, prepojenih z modificirano DNK. Če ima vaš plazmid gen, odporen na antibiotike, ki ga primanjkuje bakterij gostiteljic, lahko samodejno preverite uspešno spremenjene bakterije s kultiviranjem bakterij na rastnem mediju, ki je prepojen z antibiotiki. Obstaja več načinov za vstavitev plazmidov v bakterijo, na primer uporaba mikroobole, nanašanje električnega polja za odpiranje majhnih lukenj v membrani bakterij ali pa preprosto postavljanje bakterij in plazmidov v isto raztopino in omogočanje bakterijam, da jih absorbirajo naravno.
Vzorčne celice iz različnih kolonij spremenjenih bakterij. Vzorčene celice speremo z raztopino detergenta, da razgradimo bakterijske membrane in ekstrahiramo DNK, nato pa jo segrejemo ali izpostavimo natrijevemu hidroksidu, da ločimo pramene. To izpostavi bazno zaporedje DNK v analizo.
Inkubirajte DNK s fluorescentno sondo. Osvetlite ultravijolično svetlobo na inkubirani DNK in opazujte za fluorescenco. Sonda je sestavljena iz kratkega zaporedja DNK, ki se ujema z vstavljeno genomsko DNK. Če se sonda ujema z DNK, ki ga iščete, bo svetila ob osvetlitvi.
Izolirajte bakterije iz kolonij, ki vsebujejo gen, ki ga želite vstaviti. Podvojite DNK tako, da pustite rast bakterijskih kolonij, ali pa ekstrahirajte DNK, kot ste ga prej, in ga podvojite v napravi za verižno reakcijo s polimerazo.