Vsebina
Tekoča hranilna juha se uporablja za gojenje bakterij, kot je Escherichia coli. Recepti za to juho se razlikujejo glede na bakterijske vrste in prisotnost genetskih sprememb, na primer odpornosti na antibiotike. Juha se lahko strdi z dodajanjem agarja, ki bakterijam omogoča, da tvorijo različne kolonije, medtem ko se v tekoči kulturi preprosto razpršijo po volumnu. To je osnovna, a bistvena tehnika za napredne metode, kot sta kloniranje genov ali mikrobiološka analiza. Ta članek predvideva, da je treba standardne laboratorijske seve Escherichia coli gojiti na ploščah agarja Luria (LB) agar (ali petrijevih posodah).
Odtehtamo 10 gramov triptona z bakterijami, 5 gramov ekstrakta kvasa, 5 gramov natrijevega klorida, 15 gramov agarja ali agaroze in 1 mililiter 1N natrijevega hidroksida. Te zmešamo z volumnom destilirane in avtoklavirane sterilne vode, dokler ne dobimo 1 litra medija. 25 minut samodejno klavirajte medije v ohlapne steklenice ali bučke. Pustite, da se ohladi na približno 50 stopinj Celzija, preden dodate reagente, ki se uničijo pri visoki vročini, na primer antibiotike ali druge prehranske dodatke.
Avtoklavirani medij pustite, da se ohladi na 50 stopinj Celzija in ne manj kot 45 stopinj Celzija, saj bo agar nastavljen v posodo, preden ga lahko nalijete. Pridobite sterilno petrijevo posodo in jo nalijte toliko, da pokrije celotno površino plošče in vsaj polovico globine. Izogibajte se prenapolnjenosti krožnikov in po možnosti ne dovolite, da agar pride v stik z zgornjim robom posode. Pustite, da se plošče strdijo v sterilnem okolju (npr. Pod pokrovom laminarnega pretoka), tako da pokrove pustite pokrčene in do vogala.
Plošče posušite. Čeprav je plošče mogoče uporabiti takoj, ko jih nastavite, bo na površini agarja prisotno nekaj vlage, kar bo preprečilo, da bi se bakterijske kolonije dovolj oprijele. Zato je najbolje, da plošče posušite pred nanašanjem kakršnih koli bakterij, na primer tako, da jih pustite, da se nekaj dni ali pol ure sedijo pod pokrovom laminarnega pretoka ali v inkubatorju 37 stopinj Celzija.
Shranite krožnike. Posušene krožnike je treba zložiti na glavo (obrnjeno) na pokrovih in jih vrniti v originalno embalažo, zapirati s trakom in zaviti v folijo za zaščito pred svetlobo ali v ustrezno posodo. Na plošče vedno napišite datum priprave in se izogibajte uporabi, če so plošče stare več kot 2 meseca.